環(huán)氧合酶2(COX-2)ELISA試劑盒(大鼠 小鼠 人等)
檢測樣本:血清、血漿、細胞上清液、組織勻漿及相關(guān)生物液體等
名稱 | 96孔 | 48孔 | 備注 |
微孔酶標板 | 8孔×12條 | 8孔×12條 | 2-8℃ |
標準品 | 6支 | 6支 | -20℃(用不完) |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進行稀釋 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 2-8℃ |
底物A | 6mL | 3mL | 2-8℃ |
底物B | 6mL | 3mL | 2-8℃ |
終止液 | 6mL | 3mL | 2-8℃ |
20×濃洗滌緩沖液 | 25ml | 15ml | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
需自備的設(shè)備及試劑:
1.450±10nm濾光片酶標儀(建議儀器使用前預(yù)熱)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.
3.Eppendorf 移液器.
4.蒸餾水或去離子水.
5.脫脂棉吸水紙.
6.37℃恒溫箱.
7.100ml和1000ml量筒.
8.準備若干個標準品稀釋管.
試劑盒的儲存及有效期:
未開封的試劑盒:所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意,收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液,終止液保存于4℃,其他試劑保存于-20℃。
使用后的試劑盒:剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存,開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
實驗原理:
將目標抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入微生物化的目標抗體,將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后,加入HRP標記和親和素,再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。
精密度:
精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV表示。CV(%)=SD/mean×100
批內(nèi)差:取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測,每份樣本連續(xù)測定20次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。
批間差:選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本定量測定,每個樣本使用同一試劑盒重復(fù)測定8次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。
批內(nèi)差: CV<10% Inter-批間差: CV<13%
穩(wěn)定性:
經(jīng)測定,試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存,其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響,實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致,尤其是實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。
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